Artemisia artemisinin, utvinning, malaria INNHOLD I ARTEMISIA ANNUA L EXTRACTS MOTTATT VED ANNEN METODER

INNHOLD AV ARTEMIZININ I ARTEMISIA ANNUA L EXTRACTS OPPSTÅT MED ANDRE METODER Soktoeva, G.L. Ryzhov, K.A. Dychko, V.V. Khasanov, SV Zhshzhitzhapova, LD Padnaeed Buryat State University, st. Smolin, 24a, Ulan-Ude (Russland) Tomsk State University, 36, Lenina Ave., Tomsk (Russland) Baikal Institutt for naturforvaltning, Sibirisk gren av det russiske vitenskapsakademiet ul. Sakhyanova, 8, Ulan-Ude (Russland)

Spørsmål om isolering av artemisinin fra Artemisia annua L. og dets kvantitative bestemmelse ved bruk av HPLC-MS-metoden vurderes. Artemisinin ble isolert ved forskjellige ekstraksjonsmetoder: macerasjon, ultralyd og subkritisk CO2-ekstraksjon. Komposisjonssammensetningen av CO2 og heksano-ekstrakter ble undersøkt av GC-MS.

introduksjon

Artemisinin (1) er et peroksyd sesquiterpen [1], som er et svært effektivt antimalarielt legemiddel og en forløper for mer potente forbindelser, som artemether, artesunate og noen andre. Betydningen av artemisinin og dets derivater er basert på den meget raske virkningen av en forbindelse av denne typen mot dens hovedpatogen Plazmodium falciparum, som også forårsaker hjernesykdom. Den kjemiske og biokjemiske syntesen av artemisinin har vist seg å være svært kostbar og derfor for tiden ubrukelig som den viktigste kilden til artemisininproduksjon [2].

Malaria er forårsaket av en mikroorganisme - Plasmodium malaria. Det finnes 4 typer slike plasmodium, parasittiske i menneskekroppen: Plazmodium vivax, P. ovale, P. malariae og P. falciparum. I midten av det 20. århundre, takket være den utbredt bruken av kinin og dets derivater, var det mulig å redusere antallet pasienter med malaria betydelig. Men siden 60-tallet. Malaria på forrige århundre påminnet seg igjen om seg selv. Dette skyldes det faktum at i Thailand og Sør-Amerika viste og spre seg til andre deler av Plasmodium falciparum (P. falciparum), motstandsdyktig mot kinin, klorokin, meflokin og andre stoffer syntetisert basert kinolin [3, 4]. Problemet med å finne nye effektive antimalariale stoffer, blant annet artemisinin ble foreslått, har blitt aktuelt. Denne unike forbindelsen ble oppdaget i Kina (det kinesiske navnet er qinghaosu). Arbeidene ble startet i 1967 og ble kalt "Program 523" [5]. Den er isolert fra Artemisia annua Atemisia annua L., som er vanlig i det tidligere Sovjetunionen, som dekker de områder av Altai, Transbaikal, Amur Region, Kasakhstan, Ji, Usbekistan og Turkmenistan. Malurt er bredt representert i Kina og andre land [6]. Den totale mengden artemisinin isolert fra forskjellige deler av A. annua er ca. 0,01 og 1,4% av den tørre bladmassen [2].

Artemisia annua L. er det viktigste råmaterialet for artemisininproduksjon. Verdens helseorganisasjon i 2001 anbefalte bruk av artemisinin i førstelinjebehandling for malariakontroll, noe som førte til en økning i området under ett år gammel malurt. For det meste vokser malurt årlig i Øst-Asia, hovedsakelig i Kina og Vietnam (70% av arealet fra verdens bestand), som nylig ble introdusert i kultur i Øst-og Sør-Afrika (20% av arealets verdensareal), som gir en fjerdedel av globale helsebehov [7].
I tillegg til artemisinin, er A. annua verdsatt for sin essensielle olje, som har en karakteristisk søt, gresskledd aroma og brukes i parfyme og kosmetiske produkter. I tillegg har oljen antibakterielle egenskaper og kan brukes til å behandle hudsykdommer. I tillegg til de sesquiterpenlaktoner, som har den grunnleggende terapeutisk betydning, essensielle oljer av planter inneholder en betydelig mengde av komponenter som har verdi, slik som 1,8-cineol, artemizievy alkohol og keton, borneol og mer nylig har blitt undersøkt fettsyresammensetningen i Artemisia annua og analyserte også den fysiologiske effekten av lipofile ekstrakter på huden [2].
I forbindelse med den rike og mangfoldige sammensetningen av biologisk aktive stoffer som finnes i Artemisia annua, er søket etter nye vekstområder av årlig malurt av stor interesse. I Republikken Buryatia vokser 46 arter av polynum [8], inkludert Artemisia annua L. Innholdet av artemisinin i Polen, ett år gammelt, vokser i Buryatia, har ikke blitt studert tidligere. Derfor var formålet med dette arbeidet kvantitativ bestemmelse av artemisinin i ekstrakter oppnådd ved forskjellige ekstraksjonsmetoder.

Eksperimentell del

Råmaterialet til studien ble valgt over jord del av den polske årlige Artemisia annua L., samlet i det første tiåret av august 2010, i blomstrende fase.
Isolering av artemisinin og andre biologisk aktive stoffer (essensiell olje) ble utført ved hjelp av forskjellige ekstraksjonsmetoder: macerering, ultralydsekstraksjon og subkritisk CO2-ekstraksjon. Ekstraksjonen ble utført på laboratorieanlegg. Hexan, etylacetat, etanol og CO2 ble anvendt som ekstrakter. Og datauttrekkings parametere er vist i tabell 1. Ekstrakter fra bunnfallet fraskilt ved sentrifugering i sentrifugen ved 8UHL4.2 OP-5000 omdr. / Minutt, og deretter filtrert gjennom et filtreringssystem prøver.
Den kvantitative innholdet av artemisinin ble bestemt ved HPLC-MS ved anvendelse av en væskekromatografi klasse «Finnigan måler», som er utstyrt med automatisk prøvetaker «autosampler Plus» og pumpe «LC-pumpe og», med massselektivnym detektor «LCQ Advantage MAX» (ion trap) merke «Finnigan», ioniseringsmetode - elektrospray. Kolonne «Hypersyl Gold» 4 x 150 mm som er fylt med silisiumdioksyd-baserte sorbenten med podet fase C18 (5 mikron partikkelstørrelse) (stille termoelektroniske Corporation, USA). Elueringen ble utført isokratisk (50% (A): 50% (B)), sammensetningen av utgangsbufferen (A) - vandig løsning av maursyre (pH = 3) + 2 ml mettet ammoniumacetat, elueringsbufferen (B) - 100% acetonitril. Volumetrisk strømningshastighet for elueringsmiddel er 0,5 ml / min, volumet av den injiserte prøven (autosampler) er 25 ul. Registrere ioner som bæres i å overvåke positiv ion-modus (Selected Ion Monitoring, SIM), med molekulyarnoi vekt 300 (på grunn av binding til molekylet av artemisinin NH4 ammonium-ion) med en vindusbredde (299-301) m / z. Kvantitativ bestemmelse ble utført ved bruk av den interne standardmetoden ved bruk av tilstandsstandardprøven fra Sigma.

Ekstraksjonsmetoder og parametere

Nr. P / p Ekstraksjonsmetode Ekstraksjonsmiddel Ekstraksjonstid / ekstraksjonsparametere Artemisinininnhold i%, i form av a.s.s.
1 Makering av etanol 24 timer / råmaterialer: løsningsmiddelforhold (1: 5) 0,040 ± 0,002
2 Maceration etanol 48 timer / råmaterialer: løsningsmiddelforhold (1: 5) 0,038 ± 0,002
3 Makering av heksan 24 h / forhold av prøve: løsningsmiddel (1: 5) 0,039 ± 0,002
4 Ultralydsekstraksjon etanol 15 min / forhold av råmaterialer: løsningsmiddel (1: 5), lydfrekvens 50 Hz, T = 25 ° C 0,039 ± 0,002
5 Ultrasonisk ekstraksjon etylacetat 15 min / råmaterialer: løsningsmiddelforhold (1: 5), lydfrekvens 50 Hz, T = 25 ° C 0,022 ± 0,001
6 CO2-ekstraksjon so2 24 h / strømningshastighet 30 l / time, T = 20-22 ° C, P = 6,0-6,2 MPa 0,054 ± 0,003

I tillegg ble de flyktige komponenter av CO2- og heksanekstrakter undersøkt ved kromatografi-massespektrometri på en Agilent Packard HP 6890-gasskromatograf med en MSD 5973N quadrupol detektor. Vi brukte en 30 meter kvarts kolonne TR-5 ms med en indre diameter på d = 0,25 mm, en filmtykkelse på 0,25 μm. Kromatografisk separasjon ble utført som beskrevet i [9]. Kvalitativt ble komponentene av ekstraktene bestemt ved å sammenligne de fulle massespektrene med dataene fra biblioteket med kromatografis massespektrometriske data av flyktige stoffer av planteartikkel A.V. Tkachev, biblioteker NIST 08 og Wiley 275. Resultatene av analysen er presentert i tabell 2.

Hovedkomponentene i CO2- og heksanekstrakter
Peakområde relativ Tilkoblinger Peakområde relativ
Forbindelser av CO2-ekstrakt heksan ekstrakt
CO2 ekstrakt Hexane ekstrakt
Monoterpenoider langkjedede hydrokarboner
Tricycylen 140181 - Tricosane 103969 52288
a-pinene 1155320 - Tricozen-1 1956324 -
Camphene 2021028 - n-Pentacosane 534763 110485
R-pinen 371548 1683858 645634 - - -
n-heptacosan 279800 132358
3-caren

Sykliske hydrokarboner
limonen
Pentacyclo 576196 -
R-phellandren 587143 - [7,5,0,0 (2,8).0 (5,14) 0.
1,8-cineol 133599 - (7.11)] tetradekan
Artemisia keton 1413437 - 1,8-dimetylfenantren 3765681 1080289
Borneol 170158 707945 - - Flyuoren 3507465 319501
Bornyl acetat

diterpenoids
sesquiterpenoidene
Metyl-3,5-bis (etylamino) benzoat 627581 283913
Cariofillen 370714 214560 - -

Karyofillenoksid
Germacren D 214913 -
R-selinene 3053333 328535
a-cadinol 149485 -

Diskusjon av resultatene

Som det fremgår av dataene presentert i tabell 1, var det laveste utbyttet av artemisinin (0,022%) med ultralydsekstraksjon med etylacetat. Innhold artemisinin ekstrakter isolert ultralyd ekstraksjon og maserasjon, ved hjelp av forskjellige løsningsmidler (heksan, etylalkohol) er ikke signifikant forskjellig 0,038-0,040% basert på SAW Når man insisterer på etylalkolemalv årlig i 24 og 48 timer, er innholdet av artemisinin i de oppnådde ekstraktene omtrent det samme som henholdsvis 0,040 og 0,038%. Det høyeste utbyttet av artemisinin (0,054%) ble oppnådd under den prekritiske CO2-ekstraksjonen. Til sammenligning presenterer vi noen data om innholdet av artemisinin, i ettårig malurt, som vokser i ulike områder. Artemisia annua L., som vokser i ulike deler av Kina, inneholder fra 0,01 til 0,22% artemisinin. Noen hybrider av årlig malurt kultivert i Kina og Vietnam inneholder fra 1,0-1,5% artemisinin [10]. Innholdet av artemisinin i A. annua, som vokser i det tidligere Sovjetunionen, følgende (de verdier som er gitt i form av luft-tørkede råmateriale): Georgia SSR (0,005%), kirgisisk SSR (0,025%), Moldovan SSR (0,01-0,02%), Krasnodar (0,04%), ukrainsk SSR (0,005-0,05%), Turkmenistan (0,05% basert på sAW), Kazakhstan (0,01 til 0,05% basert på A.S.S.) [11].
I studiet av sammensetningen av ekstrakter fra Artemisia annua avledet CO2-fjerning og bløtgjøring når de benyttes som ekstraksjonsmidlet heksaner ved gass-kromatografi-massespektrometri finnes betydelige forskjeller i sammensetningen av ekstraktene. Monoterpenoider, sesquiterpenoider, langkjedede hydrokarboner, cykliske hydrokarboner og diterpenoider detekteres ved massespektrometrimetoden.
Monoterpenoider finnes bare i CO2-ekstraktet. Hovedkomponentene til CO2-ekstraktet er a-pinen, 3-karen, artemisiaketon, (3-selen, tricozen-1, 1,8-dimetylfenantren og fluoren.

I heksanekstrakt av malurt ved årlig gasskromatografi-massespektrometri ble hovedsakelig langkjedede hydrokarboner og cykliske hydrokarboner identifisert; 3-selen ble detektert fra sesquiterpenoider.
I tillegg til artemisinin, som er av primær medisinsk verdi, inneholder den essensielle oljen et stort antall komponenter av biologisk verdi, for eksempel artemisiaketon, 1,8-cynol, borneol, etc.

funn

1. Innholdet av artemisinin i forskjellige ekstrakter av A. annua (luftdel, blomstringsfase) som vokser på territoriet til republikken Buryatia ble bestemt av HPLC-MS.
2. Det maksimale artemisinininnholdet er funnet i CO2-ekstraktet (0,054% i forhold til a.s.c.),
3. Ved hjelp av kromatografisk massespektrometri ble sammensetningen av essensiell olje utvunnet ved forskjellige ekstraksjonsmetoder studert.

Artemisia annua L.
Taxon beskrivelse

Russiske navn

taksonomi

bilde

Planter på kartet

Botanisk beskrivelse

Artemisia annua L. Sp. pl. (1753) 847; Bess. i Nouv. Mem. Soc. Nat. Mosc. III, 81; Dc. Prodr. VI, 119; LDB. Fl. Ross. II, 592; Boiss. Fl. eller. III, 371; Maxim. i Bull. Acad. Sc. Petersb. Viii, 528; Hook. Fl. Br. Ind. III, 323; Com. i fl. Manchu. III, 659; Nakai, Fl. Koreansk. II, 30; Fedch. Adyge. sol. Turk. IV, 200; Rydb. North Am. Fl. 34, del 3, 259; Pampan. i Nuov. Giorn. Bot. Ital. N.S. XXXIV, 637; Hall og Clem. Artem (1923) 102; Com. og alice. Res. sol. Fjernøsten kr. II, 1036; Krasheniny. i fl. sør-øst. Europ. Del USSR, VI, 357; Grossg. Fl. Kavko. IV, 138; Krasheniny. og vinger. Fl. Zap. SiB. XI, 2816; Polyak. i Mayevsky, FL. 586. - A. chamomila Winkl. i Tr. Petersburg University. bot. Hage, X, 87; Fedch. op. Op. - Ic.: Amm. Stirp. rar. t. 193, f. 23; Gmel. Fl. SiB. II-fanen. 25. - Exs.: ГРФ № 3152. - Ett års malurt.

Årlig. Planten er duftende, grønn, bar eller med spredte, små, tilstøtende hår, med rett, ribbet, brun eller lilla brunaktig stamme 30-100 cm høy. bladene er prikkede-fossa-ferruginous, lavere petiolat, 3-5 cm lang. og 2-4 cm bred., oval, tre ganger pinnacular, segmenter av den siste rekkefølgen avlange, flippede; hele eller 1-2 tenner, 1-2 mm lange. og 0,5 mm bred; Mellom- og stambladene er doble pinnate, øvre sessile, mindre og mindre komplekse, de øverste bracts er enkle eller med et lite antall laterale lobuler. Kurver er sfæriske, 2-2,5 mm brede, talrige, avvist eller hengende, på korte ben, trukket sammen på korte grener, i b. m. lang, pyramidal panikkblomstring; Innpakningen er glatt, de ytre brosjyrene er lineært avlange, grønne, innvendige ovale eller nesten runde, med en bred kantet glanset kant rundt kanten; beholder konvekse, barne; marginale pistillatblomster, 10-20 i tall, kronefiliform, dot-glandular, smalt lineære, stigmalober, stump, eksponert fra et rør; tallerkenblomster er biseksuelle, 12-30 i antall, smalbehandlede rørformede, naken; anthers snev lineær, øvre appendage langstrakte, akutt-vinklet, basal lober veldig kort, spisse; kolonnen er kortere enn stammer, stigmatien av stigma er lineær, rett, litt avviket, ciliate på toppunktet; achenes 0,8-0,6 mm lang., avlange, ovale, flate, i toppet med en liten avrundet plattform, knapt kantet langs marginalen. Col. VIII - IX.

I ujevne steder i nærheten av boliger, hager, i hager. - Europa. h.: ​​Øvre Dniester., Øvre Dnieper., Volzh. Don., Volga., Lower. Don., Black., Bess., Krim; Kaukasus: Zap.- og Øst. Trans., Tal., Ons. Asia: Aral-Casp., Balkh., J.-Tarb., Tien-Shan., Syr-Dar., Pam. -Al., Amu-Dar., Horn. Turkmensk. Tot. var.: ons Heb., Srediz., Balk. -Maloaz., Arm.-Kurd., Iran, J.-Kashg., Kit., Jap., Mongolia, North. Amerika (fremmede).

Utsikten er tegningen av Amman og Gmelin.

Husholdninger. VAL. Utbyttet av essensiell olje er 0,1-0,64% (ifølge Goryaev). Ifølge Joshikazu Imade (1937) er cineol og substans C10H6O i oljen; Dette stoffet har blitt studert i detalj av Ashania og Joshitomi (1917); sammen med artemacyaketon, ble isomeren, isoartemisieaceton, funnet i olje. Dette ketonet var i stand til å isolere fra modervæsken som gjenstår i fremstillingen av artemacyaceton-semikarboson. Seisi Takagi (1928), fortsetter studiet av den japanske A. annua, til de fire komponentene som er kjent i olje, tilsettes to nye: kadinene og karyofillen. Basert på forskningen fra Rutovsky og Vinogradov (1929) består oljen av a-pinen, cyneol, camphene, artemisiaketon og isoartemisieseketon, en liten mengde borneol, eddiksyre og smørsyre, kimunoaldehyd (antagelig semikarboson) og fenol (sannsynligvis eugenol). En liten mengde alkaloider ble funnet i de underjordiske delene (Lazurievsky, Sadykov, 1939, Massagetov, 1947). Ifølge observasjoner i feltet (Yunatov, 1954), i grønn tilstand, blir ikke spist av husdyr. Tilstedeværelsen av alkaloider er bekreftet av M.I. Goryaeva, G.K. Kruglykhina, E.I. Satdarova (1959).

Sammendrag og avhandling om medisin (04/14/02) om emnet: Farmakognostisk studie av Artemisia annua L. og Artemisia sieversiana Willd. Buryatias flora

Sammendrag av avhandling i medisin om emnet Farmakognostisk studie av Artemisia annua L. og Artemisia sieversiana Willd. Buryatias flora

Som et manuskript

Soktoeva Tuyana Erdemovna

FARMAKOGNOSTISK FORSKNING ARTEMISIA ANNUA L. OG ARTEMISIA SIEVERSIANA WILLD. FLORA OF BURYATIA

04/14/02 - farmasøytisk kjemi, farmakognosi

Sammendrag av avhandling for graden av kandidat av farmasøytiske fag

Avhandlingen er gjort i VPO "Buryat State University" av departementet for utdanning og vitenskap i Russland og det russiske Academy of Sciences Institute of Baikal naturforvaltning, Siberian Branch av det russiske Academy of Sciences

Veileder: Doktor i kjemisk vitenskap, professor

Radnaeva Larisa Dorzhievna

Offisielle motstandere: Doktor i biologiske fag, professor

Antsupova Tatyana Petrovna

Kandidat i farmasøytiske fag Mongolov Hanhai Purbuevich

Ledende organisasjon: Perm-stat

Helse- og sosialutvikling i Russland

Beskyttelse vil bli holdt "23" i desember 2011 til 10 °° timer på et møte i avhandlingen Rådet DM 003.028.02 ved Institutt for General and Experimental Biology SB RAS på: 670 047, Ulan-Ude, ul.Sahyanovoy 6.

Avhandlingen er tilgjengelig på det sentrale vitenskapelige biblioteket i Buryat Scientific Center i SB RAS.

Abstrakt publisert 22. november 2011.

Vitenskapelig sekretær for disputasjonsrådet Kandidat i biologiske fag

GENEREL BESKRIVELSE AV ARBEID Relevans av emnet. Planter av slekten Artemisia (malurt) er lovende kilder til biologisk aktive stoffer, som for eksempel malmtreet Artemisia dracunculus L., malurt Artemisia absinthium L., malurt Artemisia vulgaris L. er mye brukt i folkemusikk, tradisjonell medisin og næringsmiddelindustri. Artemisia annua L., en årlig malurt, ble vellykket introdusert i kultur i mange land og i 2001 ble anbefalt av WHO som den viktigste kilden til artemisinin, den første linjebehandlingen av malaria. I dag gir land som produserer artemisinin omtrent en fjerdedel av globale helsebehov (Tolstikova, 2010, Xiao Wang, 2011). 137 biologisk aktive forbindelser ble isolert fra det ettårige, inkludert 40 sesquiterpener, 10 triterpener, 7 coumariner, 46 flavonoider, som kan tjene som grunnlag for medisinutvikling (Bhakuni, 2001). På 80-tallet av 1900-tallet forsøkte en gruppe forskere (Schroeter, 1989) å dyrke den vilt voksende delen av Sovjetunionens ettårige flora i CISA (Moskva). I dag utføres store arbeider ved introduksjon av førsteårsobjekt ved Tomsk State University. I Buryatia n. Annual er en vilt voksende art.

Sammen med den årlige parasitten i Buryatia, er Sivers malurt Artemisia sieversiana Willd. Utbredt, som også er en lovende art. Gresset i Seabera inneholder flavonoider, essensiell olje, kumariner (Tkachev, 2002; Shatar, 1998; Hanina, 1999; Suleimenov, 2009). Sivers essensielle olje er av interesse som en kilde til chamazulene, en giftfri forbindelse med antiinflammatoriske, bakteriedrepende, regenerative effekter (Berezovskaya, 1991; Khanina, 1992).

Så langt har en detaljert kjemisk analyse og Sievers malurt Artemisia annua flora Buryatia som en lovende kilde av biologisk aktive stoffer ikke vært, så studere dem er en utfordring.

Formål: Farmakognostisk studie av Sivers malurt Artemisia sieversiana Willd. og malurt årlige Artemisia annua L. som verdifulle kilder til biologisk aktive stoffer.

For å nå dette målet er det nødvendig å løse følgende oppgaver:

1. For å identifisere de anatomiske og diagnostiske tegnene på antennedelen av Sivers og P. ett år gammel, etablere merchandising indikatorer

råvarer, vurdere reserver og mulighet for høsting på ett år og p. Siversa på Republikken Buryatias territorium;

2. For å studere den kjemiske sammensetningen av de store grupper av biologisk aktive substanser av nevnte planter og bestemme deres kvantitative innhold, for å fastslå lokaliseringen av artemisinin og essensielle oljer i separate deler av plantene, for å studere dynamikken i deres utviklingsfasene for akkumulering og bestemme de optimale oppsamlingsbetingelsene;

3. Å utvikle en metode for kvantitativ bestemmelse av artemisinin i den ene årige antennedel

4. Bestem kvalitetsindikatorene og standardene for innholdet av grunnleggende biologisk aktive stoffer, for å utvikle regulatorisk dokumentasjon for medisinske råvarer - gresset av Sivers malurt og greset med ettårig malurt.

Vitenskapelig nyhet. De viktigste diagnostiske egenskapene til gresset i Sivers og P. årlig ble etablert, og det ble utviklet de numeriske indikatorene for standardisering av råvarer.

En undersøkelse ble gjort av den kjemiske sammensetningen av gresset i Sivers og av etårigens gress. Innholdet av essensielle oljer, flavonoider, fettsyrer, makro- og mikroelementer ble bestemt. Flavonoider - luteolin-7-glukosid, rutin, quercetin og chryoeriol ble påvist ved HPLC-MS-metoden i disse plantene. De viktigste fettsyrene i de studerte typene av malurt er palmitinsyre, linolsyre, linolensyre, 10% oktadekensyre finnes også i signifikant malurt.

Betingelsene for utvinning av artemisinin (type ekstraksjonsmiddel, ekstraksjonsmetode, ekstraksjonstid) fra årlig urt ble bestemt og det ble fastslått at maksimal ekstraksjon av artemisinin oppnås ved ultralyd og subkritisk CO2-ekstraksjon. Ved HPLC-MS er det fastslått at den største mengden artemisinin i den ettårige er inneholdt i blomstringsfasen i blomstringene.

Studier dynamikken i akkumulering av essensiell olje, avhengig av utviklingsfasen og en del av anlegget. Den største mengden av chamazulene eterisk olje p. Siversa akkumuleres i faser av spirende og blomstrende i blomsterstand.

De etablerte kvalitetsindikatorene til BAS er inkludert i reguleringsdokumentene.

Praktisk betydning. Reservene og mulige årlige innkjøpsoppkjøp av et oppgjør av Sivers og en oppgjør på ett år på territoriet til Republikken Buryatia (oppgjør av Sivers - fra 0,1 til 73,7 tonn per år og en oppgjør på ett år - fra 1,2 til 122,3 tonn per år).

En teknikk er utviklet for kvantitativ bestemmelse av artemisinin i p. Grass ved en årlig HPLC-MS-metode. Betingelsene for prøveberedning av råmaterialer til analyse for kvantitativ bestemmelse av artemisinin er vitenskapelig begrunnet.

Standardiseringen av råvarer har blitt utført, FS-prosjekter er utviklet - "Sivers Wormwood Herbal" og "Wormwood One-Year Grass".

Graden av gjennomføring. Metoden for utvinning av essensielle olje- og mikroskopiske analysedata ble testet og introdusert i utdanningsprosessen ved Institutt for apotek ved Federal State Budget Educational Institution of Higher Professional Education "Buryat State University" (Implementeringsloven nr. 1 av 6. september 2011). Prosjekter av FS på gress av Sivers malurt og ettårig malurt er forberedt for behandling.

Til forsvaret er tatt ut:

• Resultatene av studien av den anatomiske strukturen, bestandene, ekvivalenskriteriene til Sivers og P., vokser i Buryatia;

• resultater av en kjemisk undersøkelse av biologisk aktive stoffer og deres årlige dynamikk av akkumulering;

• Resultat av studier om standardisering av den overliggende delen av Sivers p. Og s. Ettår.

Tilnærming av arbeidet. De viktigste bestemmelsene i avhandlingen ble presentert og diskutert på: en vitenskapelig-praktisk konferanse med internasjonal deltakelse "Utviklingen av tradisjonell medisin i Russland: erfaring, forskning, prospekter" (Ulan-Ude, 2010); 7. Vinter Simposium på Chemometrics "Moderne Metoder for Data Analysis" (Saint-Petersburg, 2010); Den internasjonale vitenskapelige konferansen dedikert til 15-årsjubileet av Buryat State University "Faktiske studier av Baikal Asia" (Ulan-Ude, 2010); V internasjonal vitenskapelig-praktisk konferanse "Prioriteter og trekk ved utviklingen av Baikal-regionen" (Ulan-Ude, 2011); X internasjonal vitenskapelig-praktisk konferanse "Problemer med botanikk i Sør-Siberia og Mongolia" (Barnaul, 2011); IV All-Russian Conference "Nye fremskritt innen kjemi og kjemisk teknologi av plantematerialer" (Barnaul, 2009); XVI Internasjonal konferanse av studenter, postgraduate og unge forskere "Lomonosov-2009" (Moskva, 2009); XV International Ecological Student Conference "Økologi i Russland og tilstøtende territorier" (Novosibirsk, 2010); II All-Russian vitenskapelig-praktisk konferanse av studenter, studenter og unge forskere "Teknologi og utstyr av kjemisk, bioteknologisk og næringsmiddelindustri" (Biysk, 2009); All-russisk vitenskapelig-praktisk konferanse "Vegetation

Baikal-regionen og tilstøtende territorier "(Ulan-Ude, 2011); V-skoleseminaret for unge forskere i Russland "Problemer med bærekraftig utvikling av regionen" (Ulan-Ude, 2009); den regionale ungdomsvitenskapelige-praktiske konferansen med internasjonal deltakelse "Miljøvennlig og ressursbesparende teknologier og materialer" (Ulan-Ude, 2010).

Arbeidet ble utført som en del av forskningsprosjektene: RFBR: 08-04-90202-Mong_a "Studie av biogenetiske mønstre av biosyntese av biologisk aktive forbindelser av endemiske planter i Sentral-Asia" (2008-2009), 08-04-98037-r_sibir_a "Kjemisk sammensetning av planter som indikator tilstanden til økosystemene i Baikal-regionen "(2008-20 Yugg,); tverrfaglig integrering prosjekt nr. 93 "Utvikling av forskning innen medisinsk kjemi og farmakologi som et vitenskapelig grunnlag for utvikling av narkotika"; et felles prosjekt med vitenskapsakademiet i Mongolia "Å skaffe nye lipo- og nanosomale former for narkotika ved hjelp av naturlige råvarer"; RFBR: 10-03-16001-mob_ros "Mobilitet av unge forskere" (2010), 11-03-90705-mob_st vitenskapelig arbeid (opplæring) av unge russiske forskere i Russlands ledende vitenskapelige organisasjoner 2011 (2011).

Publikasjoner. Ifølge resultatene ble 17 vitenskapelige artikler utgitt, hvorav 3 ble publisert i tidsskrifter anbefalt av Høyere Attestasjonskommisjonen for Forsvarsdepartementet i Russland.

Avhandlings omfang og struktur. Avhandlingsarbeidet presenteres på 172 sider med skrevet tekst og består av innføring, gjennomgang av litteratur (1 kapittel), eksperimentell del (4 kapitler), generelle konklusjoner, referanseliste og applikasjoner. Arbeidet er illustrert med 37 bord og 61 figurer. Den bibliografiske indeksen inneholder 139 kilder, inkludert 42 utenlandske.

I introduksjonen er temaets relevans begrunnet, formålet med og målene for forskningen er formulert, den vitenskapelige nyheten og den praktiske betydningen av arbeidet presenteres.

Det første kapittelet (gjennomgang av litteraturen) presenterer data om kjemisk sammensetning, spekteret av farmakologisk aktivitet, bruk av Artemisia L. slekt i tradisjonell og moderne medisinsk praksis.

Det andre kapittelet (materialer og metoder) presenterer data om studieobjekter, metoder, enheter og reagenser, annen metodologisk informasjon.

Det tredje og fjerde kapitlet gir data om studiet av de anatomiske og diagnostiske tegnene til Severs S og et ett år gammelt. Etter metode

UV-spektrofotometri bestemmer det totale innholdet av flavonoider og tanniner i studieobjektene. Ved hjelp av GC-MS ble den kvalitative og kvantitative sammensetningen av essensiell olje og fettsyrer av malurt undersøkt. HPLC-MS-metoden etablerte det kvalitative og kvantitative innholdet av flavonoider. Den grunnleggende sammensetning av planter ble bestemt ved AAS-metoden. En teknikk for kvantifisering av artemisinininnhold er blitt utviklet og foreslått. av HPLC-MS. I tillegg undersøkte vi kjemiske sammensetninger av essensielle oljer av fem typer polynyas, mest funnet på territoriet Buryatia og Mongolia - Gmelin Artemisia gmelinii Web malurt. et stechm., malurt, grått Artemisia glauca Pall, ex Wild., malurt, storskritt Artemisia macrocephala Jacq. ex Bess., Sievers malurt Artemisia sieversiana Willd. og Artemisia annua L.

Det femte kapittelet gir data om standardiseringen av ilden til Sivers og P. av den en-årige, foreslått som lovende kilder til henholdsvis chamazulene og artemisinin.

Hovedinnholdet i arbeidet

Objekter og metoder for forskning. Objektene i studien var prøver av gress fra Sivers og årlige landsbyer samlet i ulike distriktene i Republikken Buryatia (Ivolginsky, Pribaikalsky, Selenginsky, Tunkinsky, Zakamensky, Kurumkansky) i Irkutsk-regionen (Olkhon island) og Mongolia (Selenginsky Aimak) i perioden fra 2008 frem til 2011

Mikroskopisk analyse ble utført i samsvar med artikkelen "Teknikk for mikroskopisk analyse" (GF XI, utgave 2) på Mikmed mikroskoper (Lomo, Russland) med et okular på 10x; linser 4x, 10x, 40x og MS-300 (TFXS), Fluorescerende System Set (Mikro, Østerrike) med et okular 10x; linser 4x, 10x, 40x. Utbyttet av råmaterialer ble bestemt ved metoden for regnskapssider.

Ekstraksjon av essensiell olje ble utført ved hydro-destillasjon, ekstrakter ble oppnådd ved ultralydutvinning, CO2-ekstraksjon og macerering.

Studien av den kvalitative og kvantitative sammensetningen av disse objektene ble utført ved hjelp av følgende metoder - GC-MS, HPLC-MS, TLC, BC, UV spektrofotometri og AAS. Kromato-massespektrometrisk analyse ble utført på en Agilent 6890-gasskromatograf med et HP MSD 5973N quadrupol massespektrometer (Agilent Technologies, USA; kolonner: HP-5ms, g = 0,25 mm, filmtykkelse 0,25 um (kopolymer - 5%, difenyl - 95% dimetylsiloksan) og DBWax med en indre diameter på 0,25 μm, bærergass - helium, g) strømme 1-1,5 ml / min; HPLC-MS-analyse ble utført på høyytelsesvæskekromatografer Finnigan Surveyor (Thermo Scientific, USA) og Agilent 1200 (Agilent Technologies,

USA) med masseselektiv detektor "LCQ Advantage MAX" ("ionfelle") av merket "Finnigan" (Thermo Scientific, USA) og med en tandem massespektrometrisk detektor ("ion trap") 6330 (Agilent Technologies, USA), metode ioniseringselektrospray; betingelser: Hypersyl Gold Cl8, 5 mikrometer, 150x4 mm kolonner (Thermo Electronic Corporation, USA) og Zorbax Eclipse C18, 5 mikrometer, 4,6 * 150 mm (Agilent Technologies, USA), eluentstrømningshastighet 0,5 ml / min. TLC-analyse ble utført på Sorbfil PTSH-P-A-UV-plater (Imid Ltd, Russland); BC-analyse ble utført på FN 6-papir (Filtrak, Tyskland); Absorptionsspektra ble registrert på et StellarNet Green Waiv-spektrometer (StellarNet Inc, USA). AAC-analyse ble utført på et SOLAAR MB spektrofotometer (Thermo Scientific, USA) og Varían-modellen AA240 (Varian, Russland).

Statistisk behandling av eksperimentelle data ble utført ved metoden for variasjonsstatistikkanalyse. En del av dataene ble behandlet av CIM (programvarepakke Sirius versjon 6.0, Pattern Recognition Systems, a / s, Norge).

Farmakognostiske egenskaper av urtens P. Sivers og P. om sommeren. Følgende indikatorer på kvaliteten på medisinske råvarer. Gras sibers malurt. Hele råvarer. Massive eller delvis løvrike topper av blomstrende stengler som ikke er mer enn 45 cm lange, og som ikke inneholder grove deler av stammen. Stem pubescent, rett, ribbet og forgrenet. Radikale og mellombladene er petiolate, trekantede, tre ganger pinnate, avlange flate skiver, 1,4 - 2,5 cm lange, 0,1 - 0,5 cm brede. Kurver halvkuleformede, 0,4 - 0,6 cm i diameter, bred panikulere blomsterstanden. Edge pistillate blomster (det er ca 18). Blomster biseksuelle, mange, med en trakt-formet corolla.

Gressmalm årlig. Hele råvarer. Massive eller delvis løvrike topper av blomstrende stengler ikke mer enn 50 cm lange, og som ikke inneholder grove deler av stammen. Stammen er bar, rett, furrowed, grønn i begynnelsen av vekstsesongen, mørk lilla på slutten. Bladet av de nedre og midterste bladbladene er ovoid eller oval, 1,5-7,0 cm lang på petiole, elliptisk i lengde, uten vinger, tre ganger overuttrykt til brede segmenter, segmenter og segmenter, 0,5 til 0,8 cm lang, ikke bred mer enn 0,2 cm. Kurver med en diameter på ca. 0,2 cm i panikuleringsblomstring.

Ved utførelse av en anatomisk studie av gresset i P. Sivers og P. ett år ble det identifisert en rekke anatomiske og diagnostiske egenskaper. Strukturen av bladene av malurt er presentert i tabell 1. Stammen av Sivers malurt er grov, de langstrakte epidermis-cellene.

Det er essensielle oljekirtler, T-formede hår og avrundede stomatale celler. Stammen har en bunt type struktur. I ribbeina er områder av den slanke. Collanteral bjelker arrangert i en sirkel er preget av sterkt utviklet sclerenchyma. Godmerket endoderm, bestående av store, tynnveggede celler av rund form, tett ved siden av hverandre.

Kjennetegn på den anatomiske strukturen av bladene på s. Sivers og s. Ettårig __

Siver malurt epidermis malurt årlig

øvre rettvegg

nedre svingete vegg, lavampløs

type Ustigichesky-apparatur øvre anomocytisk

lavere anomocytisk, stomata mer enn på øvre side av bladet

stomata oval form med lentil stomatal celler

Kjennetegn på håret tett pubescent med T-formede hår som består av to-, firecellede ben og multicellulære flagellaterte hår, det er to typer hår - Stellate og T-formet med et multicellulært ben

terpenoid-holdige strukturer er multicellulære, store essensielle oljekjertler. schizogene beholdere og uspesialiserte parenkymale celler

ved et år gammelt, rillet, nesten blott stamme, langstrakte epidermis celler. I det ene år gamle, så vel som i salsen Sivers, en puchkovy-type struktur, er det essensielle oljekirtler, sjeldne hår og ovale stomatale celler; I begge typer malurt er epidermale celler på corolla av rørformede blomster tynne vegger, avlange med spisse ender, preget av nærvær av et stort antall essensielle oljekirtler og fravær av hår.

Merchandising indikatorer er etablert på flere batcher av råvarer:

Gras sibers malurt. Aske uoppløselig i 10% saltsyre (ikke mer enn 2%), ekstraksjonsstoffer (ikke mindre enn 33%), brunt og svart (ikke mer enn 5%), fuktighet (ikke mer enn 7%) ), organisk urenhet (ikke mer enn 2%), mineral urenhet (ikke mer enn 0,5%).

Gressmalm årlig. Fuktighet ikke mer enn 7%, totalt aske (ikke over 9%), aske uoppløselig i 10% saltsyre (ikke mer enn 1%), ekstrakter (ikke mindre enn 42%), brune og svarte (ikke mer enn 5%) organisk urenhet (ikke mer enn 2%), mineral forurensning (ikke mer enn 0,5%).

Ifølge resultatene av en foreløpig fytokemisk analyse ble essensielle oljer, flavonoider, tanniner, hydroksykinnaminsyrer, coumariner, fettsyrer og sesquiterpenlakoner funnet i gresset til Sivers og P.

Aksjer av Sivers og P. på ett år. Tabell 2 gir data om utbytter, biologiske (BZ) og operasjonelle reserver (EZ) av Sivers, og årlig, vokser i forskjellige områder av Buryatia.

Lager av råvarer av S. Sivers og p. Av ett år i områder av Buryatia

høstareal (g / m2) total E overvekst, (ha) BS (kg) EZ (kg)

env. Gusinoozersk by 58,0 ± 4,1 0,8 530,0 398,4

env. a. Ganzurino 33,8 ± 2,4 0,4 ​​154,4 116,0

env. a. Borater 220,6 ± 15,1 20,0 50160,0 41100,0

env. med Taphar 500,0 ± 26,3 0,5 2763,0 2237,0

env. a. Sotnikovo 240,2 ± 19,4 25,0 69750,0 52850,0

env. Ulan-Ude 500,0 ± 32,5 0,5 2815,0 2175,0

Kabansky distrikt 285.SH = 19,7 30,0 97320,0 73680,0

Tunkinsky District 70,0 ± 8,0 0,2 172,0 108,0

Pribaikalsky District 280,9 ± 25,3 1,0 3315,0 2297,0

Kurumkansky-distriktet 370,6 ± 34,0 0,1 438,6 302,6

env. a. Hurumsha 228,0 ± 10,8 0,6 1497,6 1238,4

env. Befolkning 500,0 ± 46,2 30,0 177720,0 122280,0

env. a. Sotnikovo 39,0 ± 2,1 25,00 10800,0 8700,0

Kabansky District 400,0 ± 27,1 30,0 136260,0 103740,0

Produktiviteten til den overliggende delen av Sivers malurt og den årlige p. I de studerte tykkelsene varierer fra 33,8 ± 2,4 til 500,0 ± 32,5 g / m2 og henholdsvis 39 ± 2,1 til 500 ± 46,2 g / m2. De biologiske og operasjonelle reserver av de overliggende delene av de studerte plantene er 154,4-97320,0 kg og 116,0-73680,0 kg (Sivers malurt), 1,497,6177720,0 kg og 1238,4-122280,0 kg (årlig malurt).

Kjemisk studie av urt av P. Sivers og P. av årlige Flavonoider. Det totale kvantitative innholdet av flavonoider ble bestemt ved den generelt aksepterte metoden for spektrofotometrisk bestemmelse i gress av Sivers og P. annuals, når det gjelder luteolin-7-glukosid i forskjellige faser av planteutvikling (vegetasjon, spirende, blomstring, fruiting). Det høyeste innholdet av flavonoider ble etablert i prøver av Severs og ettårige prøver samlet i den spirende fasen - 0,68 og 0,66%, den laveste - i råvarene samlet i fruktfasen - 0,31% og 0,38% (tabell 3).

Det kvantitative innholdet av mengden av flavonoider i form av luteolin-7-glukosid i gresset P. Sivers og i greset av P. ett år, avhengig av vegetasjonsfasen

planteutviklingsfase, mengden av flavonoider, i form av luteolin-7-glukosid (%)

Malurt Sivers malurt årlig

vegetasjon 0,67 ± 0,02 0,64 ± 0,04

spirende 0,68 ± 0,05 0,66 ± 0,03

blomstrende 0,48 ± 0,03 0,52 ± 0,02

fruiting 0,31 ± 0,01 0,35 ± 0,01

Følgende flavonoider ble påvist ved hjelp av HPLC-MS-metoden: rutin, luteolin-7-glukosid, chryo-eriol, quercetin i gresset av Sivers og i gresset til ett år gammel (figur 1).

Fig.1. Kromatogram av flavonoider og P. Sivers, P. ett år.

Den eksterne standardmetoden ble brukt til å bestemme det kvantitative innholdet av rutin, chryseriol, quercetin i gresset til Sivers og i gresset til den ettårige (Tabell 4).

I begge typer malurt finnes luteolin-7-glukosid 0,04-0,08% (Sivers) og 0,88-1,77% (n. Ett år) i den største mengden, quercetin 0,001% (Sivers) og 0,0070,009% (n. årlig).

Det kvantitative innholdet av flavonoider (HPLC-MS)

Sivers Wormwood Flavonoide samling (%)

rutin-quercetin luteolin-7-glukosid

Ivolginsky distrikt, okr. a. Taphar, 0,002 ± 0,0001 0,001 ± 0,0002 0,040 ± 0,003

Ivolginsky distrikt, okr. p. Sotnikovo 0,002 ± 0,0002 0,001 ± 0,0001 0,080 ± 0,005

FLY er ett år gammel og Ivolginsky-distriktet, okr. p. Sotnikovo 0,018 ± 0,001 0,007 ± 0,0003 0,880 ± 0,004

Kabansky distrikt, okr. a. Kakerlakk 0,012 ± 0,002 0,009 ± 0,0003 1,700 ± 0,005

Fettsyrer. Malurtprøver inneholder fra 8 til 13 fettsyrer. Vanlig for begge arter er palmitin (16: 0), linolsyre (18: 2p6), linolensyre (18: ZpZ) syrer, i mengden 56,87-82,67% (av totale fettsyrer) i Severs, 58,36-67,19% i n. ett år (av totale fettsyrer). I tillegg til disse syrer inneholder en signifikant mengde 10-oktadekensyre (18: 1p8) fra 3,64% til 11,65%. Også i alle prøver ble det oppdaget 10-metyl-undecanoic (¡° 12: 0) og 12-methyl-tetradecanoic (og 15: 0) syrer, deres innhold overstiger ikke 1%. Kromatogrammer er vist i figur 2.

Fig. 2. Kromatogrammer av fettsyrer (a) p. Sivers og (b) p. Ettårig (I: 16: 0), 2 - (18: 2p6), 3 - (18: ЗПЗ), 4 - ).

Elementær sammensetning. I gresset på s. Sivers, som vokser i forskjellige regioner i Buryatia, er kalsiuminnholdet 0,56 ± 0,02-0,89 ± 0,03%, magnesium - 0,12 ± 0,01-0,28 ± 0,01%. Det høyeste innholdet av kalsium og magnesium er notert i prøver samlet inn i Kurumkansky-distriktet, det laveste innholdet av magnesium i råmaterialene fra Tunkinsky-distriktet, og kalsium i planter samlet inn i Selenginsky-distriktet. Jern er hovedsakelig funnet i planter fra Kurumkansky-regionen

(141,25 ± 12,13 mg / kg), mindre - fra Selenginsky-distriktet (141,25 ± 12,13 mg / kg).

Innholdet av sink varierer fra 23,73 ± 1,56 til 59,8 ± 1,56 mg / kg - п. Sivers og fra 55.32 ± 0.83 til 66.50 + 0.89 mg / kg er en ett år gammel, noe som er akseptabelt for den normale funksjonen av biokjemiske prosesser. Kobberinnholdet er 8,42 ± 0,45-24,30 ± 1,56 mg / kg -n. Sivers, 9,37 + 0,18-13,48 + 0,44 mg / kg - ett år gammelt (den nødvendige mengden er fra 5 til 30 mg / kg). Nikkel i gresset av Seabera inneholder 0,40 ± 0,01 -2,06 ± 0,03 mg / kg, noe som tilsvarer en plantebehov på 0,1 til 5 mg / kg. Koboltinnholdet i anlegget bør ikke overstige 1 mg / kg, bly - 10 mg / kg, kadmium - 0,2 mg / kg, krom - 1,0 mg / kg (Kabata-Pendias, 1989; Kashin, 2009). I Sivers er koboltinnholdet mindre enn 0,3 mg / kg, bly er 3,19 ± 0,11 mg / kg, på s. En år gammel - 0,59 ± 0,02 mg / kg, kadmium - 0,18 ± 0,02 mg / kg, krom - 0,76 ± 0,02 mg / kg i alle prøver. Innholdet av makro- og mikronæringsstoffer er således i konsentrasjoner som er normale og tilstrekkelige for strømmen av vitale funksjoner for planter.

Siver malurt urt essensiell olje. Eterisk olje fra planter ble isolert ved farmakopémetode nr. 2. I forskjellige prøver på s. Sivers essensielle oljeinnhold varierer fra 0,1 til 1,9%. I essensielle oljer av Sivers, som vokser i forskjellige deler av Buryatia, er mer enn 80 forbindelser blitt identifisert.

Vi har undersøkt sammensetningen av essensielle oljer isolert fra gresset av Sivers malurt, som vokser i forskjellige deler av Buryatia

(Ivolginsky (1), Selenginsky (2), Kurumkansky (3), Pribaikalsky (4,9),

Tunkinsky (5), Zakamensky-distriktene (8)), Irkutsk-regionen (Olkhon island) (6) og Mongolia (7). Det høyeste utbyttet av essensiell olje er i Sivers malurt i Tunkinsky og Kurumkansky regioner (0.4%). Minste mengde olje ble isolert fra planter samlet på territoriet til Zakamensky, Pribaikalsky-regionen og Mongolia (0,1%) (figur 3).

Dynamikken for akkumulering av essensiell olje ble studert avhengig av fasen av planteutvikling (figur 4). Resultatene viste at oljen i størst mulig grad akkumulerer i blomstringsfasen (0,6%), i

Fig. 3. Utbyttet av essensiell olje p. Sivers fra vekststedet.

faser av spirende og fruiting akkumulerer samme mengde essensiell olje (ca 0,3%).

L, 1,8-daneol-I-terpineal-4 3-p-farmakene 1 ■ sishna-4,11-dnen

Fig. 5. Kromatogram av essensiell olje s. Sivers.

Fig. 4. Utbyttet av essensiell olje s.

Sivers på ulike faser av planteutvikling (i voksende sesong, b - spirende, c - blomstrende,

Alle bestanddeler av essensielle oljer kan deles inn i to grupper - konstant, det vil si funnet i oljen i alle faser av planteutvikling og sporadisk oppstå (mindre). Alle essensielle oljeprøver n. Sievers, uavhengig av de voksende plantene området, funnet 1,8-cineol (2,34 til 22,57%), 4-terpineol (0.964.70%) germakren Oe (8,66 til 12,36%), P-farnesen (0,64-5,17%), Selina-4,11-dien (0,97-4,66%), Neril-2-metylbutanoat (4,80-8,79%) og Chamazulene (0,60-25,36%) (figur 5).

Eteriske oljer, isolert fra planter som vokser i steppeområdene, i Pribaikalsky-distriktet (25,36%), inneholder den minste mengden hamazulene, og den minste - i Zakamensky-distriktet (0,60%).

I sammensetningen av essensiell olje isolert fra planter i ulike faser av utvikling - vegetasjon, spirende, blomstring og fruiting ble 54 forbindelser identifisert. De konstante komponentene er 1,8-cyneol, linalool, terpineol-4, a-terpineol, p-farnezen, selina-4,11-dien, chamazulen.

Chamazulene innhold i de vegetative fase varierer 0,20 til 24,69%, i det spirende fase - 21,34 til 61,91%, i blomstringstrinnet - 1,53 til 34,42%, i fruktsettingen fase - 10,87 til 20,64%. Settet av sporadisk forekommende komponenter er signifikant (opptil 40 forbindelser) samtidig deres lave kvantitative innhold, derfor er det vanskelig å identifisere avhengigheten av deres sammensetning på fasen av planteutvikling.

For å vurdere innflytelsen fra utviklingsfasen på oljekomponentene ble brukt CIM (figur 6).

Fig. 6. GK-modell avhengig av sammensetningen

essensiell olje fra utviklingsfasen av Sivers (I-vegetasjon, 2-spirende, 3-blomstring, 4-fruiting)

Dette er en av analysene

flerdimensjonale data, som tillater å tildele skjulte variabler i store dataregister og analysere relasjoner,

eksisterende i det studerte systemet. Målet med hovedkomponentmetoden er å erstatte den opprinnelige beskrivelsen av prøver ved hjelp av p-variabler for en ny form, representert i rommet til hovedkomponentene (Esbenson, 2010).

På GK-modellen er det mulig å skille separate områder som er avgrenset fra hverandre og som svarer til forskjellige utviklingsfaser av Sivers malurt, noe som indikerer at oljesammensetningen i forskjellige faser av utviklingen er forskjellig i innholdet av mindre forbindelser.

Dermed faller den kvalitative sammensetningen av essensielle oljer i forskjellige faser av Sivers-utviklingen konstant og adskiller seg i mindre forbindelser.

En studie på faser av planteutvikling viste at den største mengden av chamazulene i den essensielle oljen av Seversa er konsentrert i spirende og blomstrende faser, mens opphopningen av olje i blomstringsfasen er større enn i den spirende fasen. Derfor studerte vi i disse faser egenskapene ved opphopning av essensielle oljer i ulike deler av anlegget (figur 7).

Om fasen av spirende I blomstringsfasen

Fig. 7. Utbyttet av essensiell olje i ulike deler av Sivers.

utvinnbar essensiell olje fra forskjellige plantedeler i blomstringsfasen viste at blomsterkilder (kurver) er preget av høyeste utbytte, blader er mindre og stengler er minimal. I fase

spirende i gresset av P. Sivers er mest av alt inneholdt olje i knoppene, litt mindre i bladene og den minste mengden olje i stilkene.

Analyse av de essensielle oljer fra forskjellige plantedeler viste at de mest varierte-komponent-blanding av olje avledet fra blomsterstand og blomsterknopper gress n Sievers -. Mer enn 70 komponenter, så etterlater - mer enn 40 bestanddeler og den minste av forbindelsene i olje utvunnet fra stilkene - 20 komponenter. De konstante komponentene til essensielle oljeprøver, uansett hvor de befinner seg, er 1,8-cyneol, linalool, terpineol-4, germacren 13, a-terpineol, a-bisabolol og chamazulene (tabell 5).

Konstante komponenter av Siver Wormwood Essential Oil

komponenter innhold av komponenter i% av hel olje

blomstrende fase spirende fase

blomsterblader forlater stengelknopper forlater stilker

1,8-cineol 8,00 6,39 6,04 1,94 + 23,41

linalool 5,93 1,38 0,65 + + 3,83

terpineol-4 2,56 2,10 0,57 0,88 + 5,37

a-terpineol 2,39 2,10 0,82 1,44 + 4,66

Germakren E 7,20 7,81 1,96 11,18 7,81 10,57

a-bisabolol 2,28 1,25 1,66 5,24 10,93 5,86

Chamazulene 6,23 23,02 37,11 7,81 21,17 3,51

Analysen viste at den kvalitative sammensetningen av essensielle oljer i ulike områder av vekst, i forskjellige utviklingsfaser og i forskjellige deler av Seversa, sammenfaller i konstant og forskjellig i sporadisk fremstående forbindelser.

Essensiell olje av malurt årlig urt. Som i første tilfelle ble valget av essensielt olje utført ved farmakopémetode nr. 2. Den kjemiske sammensetningen av s. Årlige essensielle oljer er representert av 40 komponenter. Konstant komponenter er Artemisia keton (10,24 til 14,62%), caryophyllene (9,93 til 10,71%) germakren B (3.53- 7,82%), p-Celine (21,75 til 29,46%), caryophyllene oksyd (4,44 til 14,31%) (fig. 8).

På forskjellige stadier av planteutviklingen hentes 0,5 til 0,7% essensiell olje fra malurtens urte. Det høyeste utbyttet av essensiell olje i blomstringsfasen (0,7%) (Fig.9).

I alle stadier av planteutvikling er artemisaketon, karyofillen (3-selen, karyofylnoksid) inneholdt i essensielle oljer. Det kvantitative innholdet av hovedkomponentene endres i ulike faser av planteutvikling. og karyofillenoksid - i blomstringsfasen.

3. Kromatogram av essensiell olje s. Ett år.

Fig. 9. Utbyttet av essensiell olje s. Årlig i ulike faser av planteutvikling (in-vegetasjon, b-bud, c-blomstring, p-fruiting).

De essensielle oljekjertlene er ujevnt fordelt i planten, og fra ulike deler av planten kan essensielle oljer skelnes, både kvantitativt og kvalitativt.

De spesielle egenskapene til akkumulering av essensielle oljer i blomstrende fase i ulike deler av den årlige malurt (Fig. 10) er bestemt.

Mer enn 60 forbindelser ble funnet i essensielle oljer fra ulike deler av anlegget. konstant

Komponenter for oljer fra blomstrer, blader, stilker er artemisia alkohol, p-karyofillen, oksid

Hovedkomponenten i den årlige essensielle oljen er artemisia-keton - den er ikke funnet i oljen fra stenglene, selv om den er halv i oljen fra blomsterstendigheter (49,14%) og nesten en tredjedel av bladene (29,76%).

Analysen av essensielle oljer viste at i ulike vekstområder, i ulike faser av utvikling og i ulike deler av n. Årlig gress, samt n. Sievers gress, er den essensielle oljens kvalitative sammensetning det samme i konstant og forskjellig i sporadisk fremstående komponenter.

Utvikling av en metode for kvantitativ bestemmelse av artemisinin i malurt ved en årlig metode HPLC-MS

Utvalg av betingelser for kvantitativ ekstraksjon av artemisinin fra den årlige malurt. Å utvikle en kvantitativ metodikk

1 2 i fig. 10. Utbyttet av essensiell olje i forskjellige deler av den årlige (1-blomsterstanden, 2-bladene, 3-stengene).

Artemisinin-bestemmelser i greset av P. av ett år gamle utvinningsbetingelser ble valgt under hvilke ekstraksjonen av artemisinin når sin maksimale verdi. Ekstrakter oppnådd ved metoder for macerering, ultralydsekstraksjon og subkritisk CO2-ekstraksjon ble analysert. Ulike løsningsmidler ble anvendt som ekstraksjonsmidler (tabell 6). Innholdet av artemisinin i ekstrakter separert ved ultralydsekstraksjon og macerering ved bruk av forskjellige oppløsningsmidler er ikke signifikant forskjellig (0,038-0,040%). Den største mengden artemisinin (0,054%) er inneholdt i ekstraktet oppnådd under subkritisk CO2-ekstraksjon.

Metoder og parametre for ekstrahering av ekstrakter fra grønt av malurt en-åring ved forskjellige utvinningsmetoder ______

ekstraksjonsmetode ekstraksjonsutvinningstid / ekstraksjonsparametere artemisinininnhold i%, i form av a.s.s.

etanol 24 timer / forhold av råmaterialer: løsningsmiddel (1: 5), T = 25 ° С 0,040 ± 0,002

Maceration etanol 48 h / forholdet mellom råmaterialer: løsningsmiddel (1: 5), T = 25 ° С 0,038 ± 0,002

Hexane 24 timer / prøve: løsningsmiddelforhold (1: 5), T = 25 ° С 0,039 ± 0,002

etylacetat 15 min / forholdet mellom råmaterialer: løsningsmiddel (1: 5), lydfrekvens 50 kHz, T = 25 ° С 0,022 ± 0,001

etanol 5 min. / forholdet mellom råmaterialer: løsningsmiddel (1: 5), lydfrekvens 50 KHz, T = 25 ° С 0,022 ± 0,001

Ultralydutvinning av etanol 10 min. / Forholdet mellom råmaterialer: løsningsmiddel (1: 5), lydfrekvens 50 KHz, T = 25 ° С 0,024 ± 0,001

etanol 15 min / forholdet mellom råmaterialer: løsningsmiddel (1: 5), lydfrekvens 50 KHz, T = 25 C, C 0,039 ± 0,002

etanol 20 min / forholdet mellom råmaterialer: løsningsmiddel (1: 5), lydfrekvens 50 kHz, T = 25 ° С 0,039 ± 0,002

CO2-ekstraksjon av CO2 24 h.1 strømningshastighet 30 l / h, T = 20-22 ° C, P = 6,0-6,2 MPa 0,054 ± 0,003

Av alle foreslåtte metoder for ekstraksjon er ultralydsekstraksjon optimal (etanol ekstrakt), siden denne metoden er rask (ekstraksjonstid 15 minutter) og tilgjengelig ved instrumentering.

Metode for kvantitativ bestemmelse av artemisinin.

Utviklingen av en teknikk for kvantitativ bestemmelse av artemisinin i urt av den årlige ble utført av HPLC-MS. Vi brukte Agilent 1200 HPLC med en MC-detektor ("ion trap") 6330, en ioniseringsmetode - elektrospray. Elueringen ble utført isokratisk (50% (A): 50% (B)), sammensetningen av utgangs buffer (A) og frakt maursyreløsning (pH = 3) + 2 ml av en mettet løsning av ammoniumacetat, elueringsbufferen (B) - 100% acetonitril. Den volumetriske strømningshastigheten av elueringsmiddel er 0,5 ml / min, volumet av den injiserte prøve er -25 μl. Ioner ble registrert i overvåkingsmodusen av positivt ladede ioner (SRM) med en masse på 300 (på grunn av tilsetningen av NrH4-ion til artemisininmolekylet), vindubredde (299301) m / z. Resultatene ble bekreftet ved tandem-massespektrometri; en datterjon (MS2) med en masse på 223 m / z ble oppnådd fra parent ion (MS) med en masse på 300 m / z.

Sammentreff av retensjonstider og massespektra av artemisinin definert i krav gress. Annual CO ved bruk av en løsning av forbindelsen fører til den konklusjon om identiteten av forbindelsen inneholdende rent artemisinin (ris.11,12).

Fig. 11. Kromatogram av CO artemisinin og P. årlige ekstrakt.

iv ix язтаяауат ассс »

Figur 12. Massespekter av a) artemisinin inneholdt i n. Årlig gress, b) av artemisinin CO.

For kromatografi-massespektrometri ble en absolutt kalibreringsmetode brukt for kvantitativ analyse. For å bestemme koeffisienten for kalibreringskurven ble flere (minst 20) kalibreringsløsninger av artemisisinin fremstilt. Fremstilling av oppløsninger ble utført som følger: 5 * 10 "3 g artemisinin ble veid, plassert i en 50 ml volumetrisk kolbe, 25 ml acetonitril ble tilsatt. Innholdet i kolben

grundig blandet til fullstendig oppløsning, hvoretter volumet i kolben ble ført til merket med destillert vann. Utført analyse ved forskjellig volum av den injiserte prøven fra 1 til 40 μl. Topparealet i kromatogrammet ble målt. Ifølge dataene ble en kalibreringskurve konstruert (figur 13). Verdiene av topparealet ble plottet på ordinataksen, og de tilsvarende verdier av artemisinininnhold (g) ble plottet på abscissenaksen.

Fra de oppnådde dataene ble kalibreringskurvens koeffisient beregnet: к = Б / х, hvor к er koeffisienten til kalibreringskurven, 5 er toppområdet for den analyserte løsningen, x er innholdet av artemisinin (g)

Kalibreringskurvens koeffisient (k) er definert som det aritmetiske gjennomsnittet av koeffisientene k,.

Fig. 13. Gradueringskart for å bestemme artemisinininnhold.

Artemisinininnholdet i det etårige malurt-ekstraktet ble bestemt ved formelen: C = 5 / c, hvor 5 er topparealet av artemisinin i den analyserte løsningen, og k er koeffisienten til kalibreringskurven. Metrologiske data om bestemmelsen av kalibreringskurvenes koeffisient (k) er gitt i tabell 7.

Metrologiske egenskaper ved beregning av koeffisienten til kalibreringskurven artemisinin

1 X Э2 Э Р ЮУ) Дх Е,%

19 1,32 * 10m 1,84 * О15 4,25 * 10 "95 2,09 1,28 * 10" 1,97 1,90 * 10 "

Resultatene av den kvantitative bestemmelsen av artemisinin i malurt årlige ekstrakt er presentert i tabell 8.

Resultatene av den kvantitative bestemmelsen av artemisinin i ekstraktet av malurt en-årsmetode HPLC-MS

Metrologiske egenskaper (n = 5, P = 95%)

0,039 0,75 * 10 "'0,27 * 10" 2 2,57 0,83 * 10 ° 1,21 0,12 * 10 "'

Den utviklede metoden bestemte det kvantitative innholdet av artemisinin i gresset n. Én år gammel i blomstringsfasen (Tabell 9). Teknikken er validert - spesifisitet, presisjon bekreftet.

Innholdet av artemisinin i gresset malurt årlig

Artemisinin-område og dato for innsamling (%)

Ivolginsky distrikt, 10 km fra Sotnikovo, 08/12/2010 0,054 ± 0,003

Ivolginhiy rn, 10 km fra Sotnikovo, 08/22/2011 0.027 ^.001

Ivolginsky distrikt, okr. a. Oriole, 08/19/2011 0.069 ± 0.004

Kabansky distrikt, okr. a. Tarakanovka, 08.22.2011 0.023 ± 0.001

I prøver samlet i Ivolginsky-regionen, i nærheten av Oriole inneholder den høyeste mengden artemisinin (0,069%), den minste - i prøver fra Kabansky-distriktet, okr. a. Kakerlakk (0,023%). Det ble etablert at størstedelen av artemisininplanten konsentrerer i blomstringsfasen - 0,039%, den minste - i vegetasjon og spirende faser - fra 0,006 til 0,007%. Artemisinin blomstrer inneholder - 0,029%, litt mindre - 0,021% i bladene, og minimumsbeløpet i stilkene er 0,007% (Tabell 10).

Innholdet av artemisinin i gresen av malurt årlig, avhengig av vegetasjonsfasen, i forskjellige deler av planten

utviklingsfasen av anlegget

vegetasjon spirende blomstring etterlater blomstring stengler

0,006 ± 0,0002 0,007 ± 0,0002 0,039 ± 0,003 0,021 ± 0,001 0,029 ± 0,002 0,007 ± 0,0002

Således er den optimale tiden for å samle gress i den årlige malurt blomstringsfasen, og det anbefales å samle hele antennedelen.

Alle resultatene som er oppnådd, er inkludert i FS-prosjektene på gresset av Sivers malurt og urt av den årlige malurt.

1. De viktigste diagnostiske egenskapene til gresset i Sivers og P. ettårig gress ble avslørt, de numeriske indikatorene som var nødvendige for standardisering av råvarer ble utviklet. Reservene til Sivers og P., som vokser i forskjellige områder av Republikken Buryatia, blir identifisert.

2. Innholdet av flavonoider, fettsyrer, makro- og mikronæringsstoffer i gresset av Sivers n og i greset av n. Ett år ble etablert. Flavonoider - luteolin-7-glukosid, rutin, quercetin og chryoeriol ble påvist ved HPLC-MS-metoden i disse plantene. De viktigste fettsyrene i de studerte typene av malurt er palmitinsyre, linolsyre, linolensyre, 10% oktadekensyre finnes også i signifikant malurt.

3. Det har blitt fastslått at den kvalitative sammensetningen av essensielle oljer av planter forblir konstant uavhengig av vekststed og utviklingsfase. De konstante komponentene til Sivers er 1,8-cyneol, terpineol-4, D-germakren, p-farnesen, Selina-4,11-dien, neyl-2-metylbutanoat og kamazulen og Artemisia-keton, karyofillen, germacrene ett år gammelt D, p-selen, karyofilt oksid. Akkumuleringen av essensiell olje i blomstringsfasen er større (0,7%) enn i den spirende fasen (0,3%). Den største mengden av chamazulene s. Sivers akkumuleres i faser av spirende (opptil 62%) og blomstring (opptil 34%).

4. Betingelsene for utvinning av artemisinin (type ekstraksjonsmiddel, ekstraksjonsmetode, ekstraksjonstid) fra årlig urt ble bestemt og det ble fastslått at maksimal ekstraksjon av artemisinin oppnås ved ultralyd og precrisisk CO2-ekstraksjon. En metode for kvantitativ bestemmelse av artemisinin ble utviklet og validert i en ettårig HPLC-MS-metode (relativ feilsøking på ± 1,21%). Det er blitt fastslått at den største mengden artemisinin i gresen av en årlig urt akkumuleres i blomstringsfasen i blomstrer (0,039%).

5. Utviklet forskriftsdokumenter for råvarer - prosjektet av FS "Grass of Sivers malurt" og prosjektet FS av "Gras av malurt et år".

Liste over papirer publisert på emnet av avhandlingen

1. Zhigzhitzhapova, C.B. Den kjemiske sammensetningen av essensielle oljen Artemisia gmelinii Web. et Stechm, hjemmehørende i Central Asia / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva og Plant Chemistry.-2010.-№2.-С. 131-133.

2. Zhigzhitzhapova, C.B. Kjemisk sammensetning av siver malurt essensiell olje Artemisia sieversiana Willd., Vokst i Buryatia / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva, V.V. Taraskin // Bulletin of the Buryat State University. Ser. Kjemi-fysikk. - 2009. -Med. 3. - s. 69-71.

3. Zhigzhitzhapova, C.B. Sammensetning av Siver malurt essensielle olje Artemisia sieversiana Willd., Vokst i Buryatia og Irkutsk regionen / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva, V.V. Taraskin // Bulletin of the East-Siberian Scientific Center of the Sibirian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences. - 2009. - №2 (66). -C. 103-105.

4. Zhigzhitzhapova, S.V. Sammensetningen av essensielle oljen Artemisia sieversiana Willd. ved forskjellige faser av planteutvikling / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // Brevet av det øst-sibiriske vitenskapelige senteret i den sibiriske grenen av det russiske medisinske akademi. - 2011. - №1 (77). Del 2. - s. 138-141.

5. Soktoeva, TE Komposisjonen av essensielle oljen Artemisia glauca Pall, ex Willd. flora av Mongolia / T.E. Soktoeva, S.V. Zhigzhitzhapova, LD

Radnaeva, B.B. Taraskin // Bulletin of young scientists. - Tomsk, 2011. -Vyp. 2. - s. 27-30.

6. Soktoeva, TE Den kjemiske sammensetningen av essensielle oljen Artemisia gmelinii Web. Et Stechm. / T.E. Soktoev // Lomonosov-2009: Materialer fra XVI Intern. Conf. studenter, studenter og unge forskere. - Moskva, 2009. - s. 37.

7. Zhigzhitzhapova, C.B. Essensiell olje av malurt Gmelin flora Buryatia og Mongolia / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // "Nye prestasjoner innen kjemi og kjemisk teknologi av planteråvarer": Materialer fra IV All-Russia. vitenskapelig. Conf. - Barnaul, 2009. - s. 49-50.

8. Soktoeva, T.E. Sammensetningen av essensielle oljen av Sivers malurt Artemisia sieversiana Willd., Som vokser i Republikken Buryatia / T.E. Soktoeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Teknologi og utstyr av kjemisk, bioteknologisk og næringsmiddelindustri": materialer fra II Vseross. Viten. Conf. studenter, studenter og unge forskere. - Biysk, 2009. - s. 91-93.

9. Pavlova E.T. Kromatografisk separasjon og kvantitativ bestemmelse av komponentene av legemidler ved hjelp av HPLC / TE Soktoeva, T.A. Kolodin // "Problemer med bærekraftig utvikling av regionen": Materialer fra VTH Skole-Seminar for unge forskere i Russland. - Ulan-Ude, 2009. - s. 222-223.

10. Zhigzhitzhapova, S.V. Sammenligningsanalyse av kjemiske sammensetninger av Artemisia L., vokser i Sentral-Asia / S.V. Zhigzhitzhapova, T.E. Soktoeva, L.D. Radnaeva, O. Grahl-Nilsen // "Modemmetoder for dataanalyse" Sjuende Vinter Simposium på Chemometrics. - St. Petersburg, 2010. - s. 82-83.

11. Soktoeva, T.E. Sammenligning av sammensetningen av essensielle oljer av polynia av slekten Artemisia L., dyrket i Sentral-Asia / TE Soktoeva // "Miljøvennlig og ressursbesparende teknologier og materialer": Materialer i regionen, ungdomsvitenskapelig. Conf. fra intern. deltakelse. - Ulan-Ude, 2010.-S. 109-110.

12. Zhigzhitzhapova, C.B. Eteriske oljer av artemisia L. / C.B. polynia genus. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // "Utviklingen av tradisjonell medisin i Russland: Erfaring, forskning, perspektiver": materialer nauchn. Conf. fra intern. deltakelse. - Ulan-Ude, 2010. - s. 405-407.

13. Soktoeva, T.E. Sammensetningen av essensielle oljen av søsken malurt Artemisia sieversiana Willd. / T.E. Soktoeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Faktiske studier av Baikal Asia": Internets materialer. Viten. Conf, - Ulan-Ude, 2010. - s. 309-312.

14. Badmaeva, E.E. Sammensetningen av essensielle oljen Artemisia macrocephala Jacq. ex Bess. vokser i Mongolia / E.E. Badmaeva,

TE Soktoeva // "Russlands økologi og tilstøtende territorier": materialer fra XV International. miljøkonsekvenser - Novosibirsk, 2010. - s. 325.

15. Badmaeva, E.E. Sammensetningen av essensielle oljen Artemisia annua / EE. Badmaeva, T.E. Soktoyeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Miljøvennlig og ressursbesparende teknologi": materialer Vseross. ungdomskonferanse. fra intern. deltakelse. - Ulan-Ude, 2011. -C. 156-157.

16. Soktoeva, T.E. Ekstraksjon av artemisinin fra malurt årlig Artemisia annua L. / T.E. Soktoeva, G.L. Ryzhov, K.A. Dychko, V.V. Khasanov, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Prioriteter og egenskaper ved utviklingen av Baikal-regionen": Materialer fra Vth International. Viten. Conf. - Ulan-Ude, 2011. - s. 127-128.

17. Zhigzhitzhapova, C.B. Den kjemiske sammensetningen av Artemisia annua L. / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // "Vegetation av Baikal-regionen og tilstøtende områder": materialer fra Vseross. Viten. Conf. - Ulan-Ude, 2011. - s. 152-153.

AAS atomabsorpsjonsspektrofotometri

fvmh helt tørre råvarer

BAS biologisk aktive stoffer

GZ biologiske reserver

BH papirkromatografi

WHO Verdens helseorganisasjon

HPLC-MS høyytelsesvæske massekromatografi

GF State Pharmacopoeia

ISC metode for hovedkomponenter

CO standard prøve

de tynne lagskromatografi

EZ operasjonelle reserver

SRM Velg reaksjonsovervåking

Forfatteren uttrykker oppriktig takknemlighet til studieleileder, D.Sc., prof. LD Radnaeva, samt doktorgradsdirektør, seniorforsker Baikal Institutt for naturforvaltning av den sibiriske grenen av det russiske vitenskapsakademiet Zhigzhitzhapova C.B., Doktor i kjemi, honorær professor Tomsk State University Ryzhova G.L. for hjelp og støtte ved utarbeidelsen av avhandlingen.

Det ble signert i utskrift 11/21/2011. Format 60x84 1/16. Offset papir. Volum 1,5pech. l. Sirkulasjon 100. Bestillingsnummer 67.

Trykt i utgiverhuset BNTS SB RAS. 670047 Ulan-Ude, ul. Sakhyanova, 6.

Innholdsfortegnelse for Soktoevs avhandling, Tuyana Erdemovna :: 2011 :: Ulan-Ude

Kapittel 1. REVISJON AV LITERATUR

Den nåværende tilstanden for forskning på studiet av slekten Artemisia L.

1.1. Botaniske egenskaper av Sivers malurt og 12. årlige malurt

1.2. Eteriske oljer og naturlige azulene planter av slekten Wormwood

1.2.1. Den kjemiske sammensetningen av essensielle oljer og naturlige azulene 14 planter av slekten Wormwood

1.2.2. Bruk av essensielle oljer av planter av slekten Wormwood i medisin

1.2. Artemisinin: funn, struktur og syntese, fysisk-kjemiske 31 egenskaper, mekanisme for antiplasmodium-virkning

1.3. Fettsyre sammensetning av planter av slekten Wormwood

1.4. Fenoliske forbindelser av planter av slekten Wormwood

1.5. Den grunnleggende sammensetningen av planter av slekten Wormwood 38 KONKLUSJONER TIL KAPITTEL

KAPITTEL 2. KARAKTERISTIKER AV OBJEKTER OG METODER 41 FORSKNING

2.1. Objekt av studier, prøver av råvarer - Gress av Sivers malurt og 41 urter av malurt årlig

2.2. Forskningsmetoder

2.2.1. Biologiske forskningsmetoder

2.2.1.1. Anatomisk og diagnostisk studie

2.2.1.2. Ressursforskning

2.2.2. Metoder for kvalitativ og kvantitativ bestemmelse av 43 biologisk aktive stoffer

2.2.3. Merchandising Analysis: Metoder for å etablere 50 gode råvarer

2.2.4. Metoder for statistisk behandling. Hovedkomponentmetoden.

KAPITTEL 3. FARMAKOGNOSTISK ANALYSE AV HERBAL HERBALIS 53 CIVERS

3.1. Mikroskopisk analyse av gress av Sivers malurt

3.2. Sibers Wormwood Lagre

3.3. Studien av de viktigste BAS gress søsken malurt

3.3.1. Kvalitativt og kvantitativt innhold av komponentene 64 essensielle oljer av Sivers malurt

3.3.1.1. Den kjemiske sammensetningen og dynamikken til opphopning av essensiell olje og 64 hamazulena i gresset av Sivers malurt i ulike områder av Buryatia

3.3.1.2. Spesielle egenskaper for akkumulering av essensiell olje og chamazulene i gresset av 65 Sivers malurt i ulike faser av planteutvikling

3.3.1.3. Akkumuleringen av mindre komponenter av gresens essensielle olje 71 Sivers malurt

3.3.1.4. Funksjoner av akkumulering av essensiell olje og chamazulene i gresset 72 Siver malurt fra forskjellige deler av anlegget

3.3.2. Det kvalitative og kvantitative innholdet av flavonoider og tanniner i gresset av Sivers malurt

3.3.3. Fettsyre sammensetning av gress av Sivers malurt

3.3.4. Elemental sammensetning av urte malurt årlige KONKLUSJONER TIL KAPITTEL

KAPITTEL 4. FARMAKOGNOSTISK ANALYSE AV HERBAL HERBALER 83 ENÅR

4.1. Mikroskopisk analyse av urte malurt årlig

4.2. Aksjer av malurt årlig

4.3. Studien av de viktigste BAS-urtens malurt årlig

4.3.1. Det kvalitative og kvantitative innholdet av komponentene i essensielle oljen i urte malurt årlig

4.3.1.1. Den kjemiske sammensetningen og dynamikken til akkumulering av essensiell olje i 92 gres på ettårig malurt fra forskjellige vekststeder

4.3.1.2. Særegenheter av opphopning av essensiell olje i gresen av malurt ^ årlig på ulike faser av utvikling og i forskjellige deler av anlegget

4.3.2. Kvalitativ og kvantitativ bestemmelse av flavonoider gres 100 malurt årlig

4.3.3. Fettsyrekomposisjon av urte malurt årlig ^ ® *

4.3.4. Den grunnleggende sammensetningen av urtens malurt årlig

4.4. Utvikling av en metode for kvantitativ bestemmelse av artemisinin i 103 gress av en malurt ved en årlig metode for HPLC-MS

4.4.1. Utvalg av betingelser for kvantitativ ekstraksjon av artemisinin fra 103 ettårig malurt

4.4.2. Utvikling av en teknikk for kvantitativ bestemmelse av artemisinin 104 ved HPLC-MS

4.4.3. Kvantitativt innhold av artemisinin i årlige malurt fra forskjellige vekststeder

4.4.4. Analyse av det kvantitative innholdet av artemisinin i gresset 107 malurt årlig på ulike faser av utvikling og i forskjellige "deler av anlegget"

KAPITTEL 5. INNSTILLING AV INDIKATORER 111 GODDOM AV RÅMATERIALER

5.1. Morfometriske indikatorer på råmaterialer

5.2. Standardisering av gres søsken malurt

5.2.1. Merchandising indikatorer gress Sills malurt!

5.2.2. Standardisering av Siver malurt urt etter innholdet av 115 hamazulelen i sammensetningen av essensiell olje

5.2.3. Etablering av holdbarheten til Sivers malurtgress

5.3. Standardisering av urte malurt årlig ^ ^ ^

5.3.1. Vareindikatorer gress sagebrush årlig * '^

5.3.2. Standardisering av urte malurt årlig på innholdet av artemisinin

5.3.3. Etablere holdbarheten til urte malurt årlig

Innføring av avhandlingen om temaet "Farmasøytisk kjemi, farmakognosi", Soktoeva, Tuyana Erdemovna, abstrakt

Relevans av emnet. Planter av slekten Artemisia (malurt) er lovende kilder til biologisk aktive stoffer, som for eksempel malmtreet Artemisia dracunculus L., malurt Artemisia absinthium L., malurt Artemisia vulgaris L. er mye brukt i folkemusikk, tradisjonell medisin og næringsmiddelindustri. Artemisia annua L., en årlig malurt, ble vellykket introdusert i kultur i mange land og i 2001 ble anbefalt av WHO som den viktigste kilden til artemisinin, den første linjebehandlingen av malaria. I dag gir land som produserer artemisinin omtrent en fjerdedel av globale helsebehov [1, 2]. 137 biologisk aktive forbindelser ble isolert fra den ettårige, inkludert 40 sesquiterpener, 10 triterpener, 7 coumariner, 46 flavonoider, som kan danne grunnlag for medisinutvikling [3]. På 80-tallet av 1900-tallet forsøkte en gruppe forskere [4] å dyrke den vilt voksende delen av Sovjetunionens ettårige flora i ULI (Moskva). I dag utføres store arbeider ved introduksjon av førsteårsobjekt ved Tomsk State University. I Buryatia n. Annual er en vilt voksende art.

Sammen med den en årige i Buryatia er Sivers malurt Artemisia sieversiana Willd. Utbredt, som også er en lovende art. I gresset av P. Sievers inneholder flavonoider, essensiell olje, kumariner [5-8]. Essensiell olje av Seabera er av interesse som en kilde til Chamazulene, en giftfri forbindelse med antiinflammatoriske, bakteriedrepende, regenerative effekter [9, 10].

Så langt har en detaljert kjemisk analyse og Sievers malurt Artemisia annua flora Buryatia som en lovende kilde av biologisk aktive stoffer ikke vært, så studere dem er en utfordring.

Formål: Farmakognostisk studie av Sivers malurt Artemisia sieversiana Willd. og malurt årlige Artemisia annua L. som verdifulle kilder til biologisk aktive stoffer.

For å nå dette målet er det nødvendig å løse følgende oppgaver:

1. Identifisere de anatomiske og diagnostiske egenskapene til den ovennevnte delen av Sivers p. Og p. Ettårig, etablere råvareindikatorer for råvarer, vurdere reserver og mulighet for høsting av et år og Sivers på territoriet til Republikken Buryatia;

2. For å studere den kjemiske sammensetningen av de store grupper av biologisk aktive substanser av nevnte planter og bestemme deres kvantitative innhold, for å fastslå lokaliseringen av artemisinin og essensielle oljer i separate deler av plantene, for å studere dynamikken i deres utviklingsfasene for akkumulering og bestemme de optimale oppsamlingsbetingelsene;

3. Å utvikle en metode for kvantitativ bestemmelse av artemisinin i den ene årige antennedel

4. Bestem kvalitetsindikatorene og standardene for innholdet av grunnleggende biologisk aktive stoffer, for å utvikle regulatorisk dokumentasjon for medisinske råvarer - gresset av Sivers malurt og greset med ettårig malurt.

Vitenskapelig nyhet. De viktigste diagnostiske egenskapene til gresset i Sivers og P. årlig ble etablert, og det ble utviklet de numeriske indikatorene for standardisering av råvarer.

En undersøkelse ble gjort av den kjemiske sammensetningen av gresset i Sivers og av etårigens gress. Innholdet av essensielle oljer, flavonoider, fettsyrer, makro- og mikroelementer ble bestemt. Flavonoider - luteolin-7-glukosid, rutin, quercetin og chryoeriol ble påvist ved HPLC-MS-metoden i disse plantene. De viktigste fettsyrene i de studerte typene av malurt er palmitinsyre, linolsyre, linolensyre, 10% oktadekensyre finnes også i signifikant malurt.

Betingelsene for utvinning av artemisinin (type ekstraksjonsmiddel, ekstraksjonsmetode, ekstraksjonstid) fra årlig urt ble bestemt og det ble fastslått at maksimal ekstraksjon av artemisinin oppnås ved ultralyd og subkritisk CO2-ekstraksjon. Ved HPLC-MS er det fastslått at den største mengden artemisinin i den ettårige er inneholdt i blomstringsfasen i blomstringene.

Studier dynamikken i akkumulering av essensiell olje, avhengig av utviklingsfasen og en del av anlegget. Den største mengden av chamazulene eterisk olje p. Siversa akkumuleres i faser av spirende og blomstrende i blomsterstand.

De etablerte kvalitetsindikatorene til BAS er inkludert i reguleringsdokumentene.

Praktisk betydning. Reservene og mulige årlige innkjøpsoppkjøp av en oppgjør av Sivers og en oppgjør på ett år på Republikken Buryatias territorium (oppgjør av Sivers - fra 0,1 til 73,7 tonn per år og en oppgjør på ett år fra 1,2 til 122,3 tonn per år).

En teknikk er utviklet for kvantitativ bestemmelse av artemisinin i p. Grass ved en årlig HPLC-MS-metode. Betingelsene for prøveberedning av råmaterialer til analyse for kvantitativ bestemmelse av artemisinin er vitenskapelig begrunnet.

Standardiseringen av råvarer har blitt utført, FS-prosjekter er utviklet - "Sivers Wormwood Herbal" og "Wormwood One-Year Grass".

Graden av gjennomføring. Metoden for utvinning av essensielle olje- og mikroskopiske analysedata ble testet og introdusert i utdanningsprosessen ved Institutt for apotek ved Federal State Budget Educational Institution of Higher Professional Education "Buryat State University" (Implementeringsloven nr. 1 av 6. september 2011). Prosjekter av FS på gress av Sivers malurt og ettårig malurt er forberedt for behandling.

Tilnærming av arbeidet. De viktigste bestemmelsene i avhandlingen ble presentert og diskutert på: en vitenskapelig-praktisk konferanse med internasjonal deltakelse "Utviklingen av tradisjonell medisin i Russland: erfaring, forskning, prospekter" (Ulan-Ude, 2010); 7. Vinter Simposium på Chemometrics "Moderne Metoder for Data Analysis" (Saint-Petersburg, 2010); Den internasjonale vitenskapelige konferansen dedikert til 15-årsjubileet av Buryat State University "Faktiske studier av Baikal Asia" (Ulan-Ude, 2010); V internasjonal vitenskapelig-praktisk konferanse "Prioriteter og trekk ved utviklingen av Baikal-regionen" (Ulan-Ude, 2011); X internasjonal vitenskapelig-praktisk konferanse "Problemer med botanikk i Sør-Siberia og Mongolia" (Barnaul, 2011); IV All-Russian Conference "Nye fremskritt innen kjemi og kjemisk teknologi av plantematerialer" (Barnaul, 2009); XVI Internasjonal konferanse av studenter, postgraduate og unge forskere "Lomonosov-2009" (Moskva, 2009); XV International Ecological Student Conference "Økologi i Russland og tilstøtende territorier" (Novosibirsk, 2010); II All-Russian vitenskapelig-praktisk konferanse av studenter, studenter og unge forskere "Teknologi og utstyr av kjemisk, bioteknologisk og næringsmiddelindustri" (Biysk, 2009); All-russisk vitenskapelig-praktisk konferanse "Baikal-regionen og tilstøtende territorier" (Ulan-Ude, 2011); V-skoleseminaret for unge forskere i Russland "Problemer med bærekraftig utvikling av regionen" (Ulan-Ude, 2009); den regionale ungdomsvitenskapelige-praktiske konferansen med internasjonal deltakelse "Miljøvennlig og ressursbesparende teknologier og materialer" (Ulan-Ude, 2010).

Arbeidet ble utført som en del av forskningsprosjektene: RFBR: No. 08-04-90202-Monga "Studie av biogenetiske mønstre av biosyntese av biologisk aktive forbindelser av endemiske planter i Sentral-Asia" (2008-2009), nr. 08-04-9803 7-rsibirya og

Den kjemiske sammensetningen av planter som en indikator på tilstanden til økosystemene i Baikal-regionen (2008-2010); tverrfaglig integrasjonsprosjekt №93 "Utvikling av forskning innen medisinsk kjemi og farmakologi som vitenskapelig grunnlag for utvikling av narkotika"; et felles prosjekt med vitenskapsakademiet i Mongolia "Å skaffe nye lipo- og nanosomale former for narkotika ved hjelp av naturlige råvarer"; RFBR: № 10-03-16001-mobzros "Mobilitet av unge forskere" (2010), №11-03-90705-mobst vitenskapelig arbeid (opplæring) av unge russiske forskere i ledende vitenskapelige organisasjoner i Russland 2011 (2011).

Publikasjoner. Ifølge resultatene ble 17 vitenskapelige artikler utgitt, hvorav 3 ble publisert i tidsskrifter anbefalt av Høyere Attestasjonskommisjonen for Forsvarsdepartementet i Russland.

Til forsvaret er tatt ut:

• Resultatene av studien av den anatomiske strukturen, bestandene, ekvivalenskriteriene til Sivers og P., vokser i Buryatia;

• resultater av en kjemisk undersøkelse av biologisk aktive stoffer og deres årlige dynamikk av akkumulering;

• Resultat av studier om standardisering av den overliggende delen av Sivers p. Og s. Ettår.